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玩轉uniprot數據庫

一、Uniprot蛋白數據庫介紹及使用詳解 Uniprot數據庫是資源最廣、信息最豐富的蛋白質數據庫，是查詢蛋白功能的首選數據庫。Uniprot數據庫由Swiss-Prot、TrEMBL和PIR-PSD三大子數據庫構成，數據主要來自于各物種基因組測序完成后得到的全基因蛋白質序列，并包含了很多來自文獻中的蛋白及其功能信息。尤其是swiss-prot 子數據庫，庫中蛋白質信息都是手工核對過的 ，非冗余， 有詳細注釋信息的蛋白數據。作為一名科研工作者，Uniprot數據庫的使用技能應該是必備的技能之一。 （1）UniProtKB（UniProt Knowledgebase）是蛋白質序列、

2022-06-07

RNA樣本準備指南

1、樣本RNA得率以及各類項目最低起始量 ? 各樣本Total RNA得率統計（僅供參考）： 測序項目推薦起始量（起始量僅供參考，外泌體不允許18s/28s rRNA有峰）： 表達譜芯片及小RNA測序體液樣本及外泌體項目起始量（僅供參考） ? 2、各類樣本準備指南 2.1 動物組織/臨床組織采集 ① 取新鮮組織，組織體積要小，盡量長寬高≤0.5cm，考慮到可操作性，所切組織塊的大小可參考綠豆顆粒的大小 ② 去除非研究的組織類型（如結締組織，脂肪組織等），如果是臨床病變組織的取材要正確判斷病變以及正常組織，應將病變組織

2022-06-06

淺析免疫共沉淀(Co-IP)原理和詳細實驗步驟教程

一、原理：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。 其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內結合的蛋白質Y也能沉淀下來。 目前多用精制的prorein A預先結合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應后，beads上的prorein A就能吸附抗原達到精制的目的。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結

2022-06-06

什么是ELISA--原理與分類

一、基本原理 1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法。 這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗

2022-05-23

內參抗體怎么選

內參抗體可用于評價蛋白質免疫印跡法(Western Blot)的效率，比較凝膠中每孔的蛋白上樣量。此類對照可幫助確定樣品間表達水平的差異，以判斷是由細胞裂解物的實際蛋白水平導致，還是由上樣量的差異導致。 內參抗體主要功能 （1）檢測整個WB流程是否正常 （2）檢測基因表達產物是否正確 （3）比較產物微量的相對變化 （4）評價各個上樣孔內蛋白的總量是否基本一致 圖一示例 內參抗體在目標蛋白的免疫熒光研究中，也可以作為共染的陽性對照。內參抗體分為未標記型和標記型，標記物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。

2022-05-11

ELK Biotechnology歸納Elisa實驗中樣本的制備與保存

樣品收集注意事項 1. ? 樣品收集后若在1周內進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝 （ELK Biotechnology單指標夾心法試劑盒，單孔標準上樣量為100μl?），凍存于-20℃(1個月內檢測)，或-80℃(3個月內檢測)，避免反復凍融。融化樣本在試驗前請再次離心以去除凍融后可能出現的沉淀物。 2. ? 試劑盒檢測范圍不等同于樣本的濃度范圍，如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品最高值，請根據實際情況，做適當倍數稀釋(建議查閱文獻后先做預實驗，以確定稀釋倍數)。 3. ? 若所檢樣本不在說明書所列樣本之中，建議做預實驗驗證其檢測有效性。

2022-05-04

通過兩種軟件計算ELISA結果

方法一：使用Curve  Expert1.4軟件（點擊下載Curve  Expert1.4） 標準曲線的繪制  可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標準曲線，下面以“Curve  Expert1.4”軟件為例，繪制ELISA標準曲線的方法如下； 1．啟動“Curve  Expert” 2．X軸輸入標準品的OD值（雙抗夾心輸入OD-空白值），Y軸輸入所對應的濃度值，如圖： 3．單擊[運行]  按鈕，出現如下對話框 4．單擊[ok

2022-05-04

ELISA實驗操作視頻

2022-04-26